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ELISA實驗中不同類型樣本的處理方法

更新時間:2025-07-07    點擊次數(shù):453

  

  以下是本生ELISA實驗中不同類型樣本處理方法的詳細總結,按樣本類型分類說明:

  一、血清樣本處理

  采集與靜置?

  使用無熱原、無內毒素試管采集血液,室溫靜置1-2小時或4℃過夜使血液凝固。

  傾斜試管可擴大液面橫截面,促進血清分離。

  離心與保存?

  4℃條件下以1000×g離心15-20分鐘,收集上清。

  分裝后于-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

  注意事項?

  避免溶血(紅細胞破裂釋放過氧化物酶會導致假陽性)。

  避免細菌污染(內源性HRP干擾結果)。

  二、血漿樣本處理

  抗凝劑選擇?

  常用EDTA(2%)、肝素(1%)或檸檬酸鈉(3.8%)。

  抗凝劑與血液比例需嚴格按說明書要求(如檸檬酸鈉1:9)。

  離心與保存?

  采集后30分鐘內4℃離心(1000×g,15分鐘)。

  上清分裝凍存(-20℃或-80℃),避免高血脂或溶血樣本。

  三、細胞培養(yǎng)上清處理

  離心去除雜質?

  直接收集上清,4℃條件下以1000×g離心20分鐘去除細胞碎片。

  建議二次離心以提高純度。

  保存條件?

  分裝后-80℃凍存,避免反復凍融。

  四、組織勻漿處理

  前處理?

  用預冷PBS(0.01M,pH7.4)沖洗組織,去除血液殘留。

  稱重后剪碎,按1:9(重量體積比)加入PBS或裂解液。

  勻漿與離心?

  冰浴條件下機械勻漿或超聲破碎。

  4℃條件下以5000-10000×g離心5-10分鐘,收集上清。

  蛋白濃度測定?

  使用BCA法測定總蛋白濃度,調整至統(tǒng)一水平后檢測。

  五、其他樣本處理

  尿液?

  2-8℃下以1000×g離心15分鐘去除雜質。

  糞便?

  PBS重懸后冰上振蕩15分鐘,5000×g離心5分鐘取上清。

  腦脊液/胸腹水?

  直接離心(4000-5000×g,10分鐘)后取上清。

  六、通用注意事項

  避免反復凍融?:所有樣本分裝保存,凍融不超過3次。

  檢測時效?:-20℃保存樣本需在1-6個月內檢測,4℃保存樣本需1周內完成。

  污染控制?:操作全程避免細菌污染及外源性酶干擾(如NaN3抑制HRP活性)。

  以上方法需結合具體試劑盒說明書調整。

  注:以上資料僅供參考,完整操作請以實說明為準,不同品牌可能存在細節(jié)差異?。

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